Estimasi kuantitatif kelarutan fosfat adalah dilakukan dengan menggunakan labu Erlenmeyer (100 ml) berisi 45 ml medium diinokulasi dalam rangkap tiga dengan empat cakram (5 mm diameter) kultur aktif masing-masing Trichoderma sp. regangan. Inkubasi dilakukan pada 28+10 C dalam pengocok inkubator (Sanco, India) pada 120 rpm selama 5 hari.Â
Sebuah aliquot dari 5 ml ditarik secara berkala dari setiap labu kultur pada interval 24 jam. Itu sampel kemudian disentrifugasi (Sigma, Jerman) pada 5.000 rpm selama 10 menit dan supernatan dari masing-masing kultur dianalisis pH (pH meter, Systronics) dan konsentrasi fosfat.Â
Fosfat dalam kultur supernatan diperkirakan menggunakan Fiske dan Metode Subbarow (1925) (8), dan dinyatakan sebagai ekuivalen fosfat (g.ml -1). Percobaan dilakukan di rangkap tiga dan nilai dinyatakan sebagai rata-ratanya. Penentuan aktivitas enzim fosfatase
Berdasarkan studi pelarutan-P, dua isolat Trichoderma sp. (DRT-1 dan PRT-1) yang menunjukkan potensi kelarutan maksimum dipilih untuk enzim fosfatase studi induksi menggunakan media kaldu Pikovskaya diubah dengan tiga kombinasi yang berbeda dari terikat fosfat (TCP)dan fosfat yang tersedia (KH2PO4): (1) TCP @ 10 g.l-1, tapi tidak KH2PO4; (2) TCP @ 10 g.l -1+ KH2PO4 @ 0,5 g.l -1 dan (3) KH2PO4 @ g.l-1 , tetapi tidak ada TCP. Supernatan (seperti yang diperoleh sebelumnya) digunakan sebagai minyak mentah ekstrak enzim untuk menentukan fosfatase ekstraseluler aktivitas enzim secara spektrofotometri (Beckmann DU, USA) pada 405 nm, menggunakan metode yang dijelaskan oleh Lowry et al. (1951)
 Referensi
Guzmn-Guzmn, P., Porras-Troncoso, M. D., Olmedo-Monfil, V., & Herrera-Estrella, A. (2019). Trichoderma species: versatile plant symbionts. Phytopathology, 109(1), 6-16.
Stracquadanio, C., Luz, C., La Spada, F., Meca, G., & Cacciola, S. O. (2021). Inhibition of mycotoxigenic fungi in different vegetable matrices by extracts of Trichoderma species. Journal of Fungi, 7(6), 445.
Di Lelio, I., Coppola, M., Comite, E., Molisso, D., Lorito, M., Woo, S. L., ... & Digilio, M. C. (2021). Temperature differentially influences the capacity of Trichoderma species to induce plant defense responses in tomatoes against insect pests. Frontiers in plant science, 12.
